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淬灭剂的作用(淬灭)

更新时间:2024-02-01 08:00:22

导读 你们好,最近小艾特发现有诸多的小伙伴们对于淬灭剂的作用,淬灭这个问题都颇为感兴趣的,今天小活为大家梳理了下,一起往下看看吧。1、要

你们好,最近小艾特发现有诸多的小伙伴们对于淬灭剂的作用,淬灭这个问题都颇为感兴趣的,今天小活为大家梳理了下,一起往下看看吧。

1、要解释这种情况发生的原因,必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化,产生荧光,这个过程被发光增强剂加强,增强剂在HRP-鲁米诺-H2O2体系中扮演着核心角色,决定着ECL化学发光的发展。

2、理想的发光增强剂是:1.发光灵敏,目前一般的发光增强剂都可以将发光灵敏度提高1000倍至100000倍以上,可以检测pmol甚至fmol级别的HRP,发光的灵敏度实际上已不是问题。2.发光稳定,这是目前研究的重点之一,发光不稳定的增强剂,容易在一些情况下发生“淬灭”,即快速消耗发光试剂,在几秒钟内发强光,又在几秒钟内迅速消逝,不容易被检测的现象。3.本底或背景低,这是发展的方向之一,由于化学发光反应对增高本底的因素很敏感,因此,化学发光分析欲得到准确可靠的结果,就必须确保试剂的特异性,在无HRP或很少HRP的情况下,不发光或很少发光。

3、所以,Western Blot“淬灭”的原因主要在两方面:含HRP的抗体和发光试剂。由于长期应用某种发光试剂,人们多注意了抗体,不知道发光试剂其实也会对实验结果造成重大影响。对抗体方面来说,可以采用适当降低抗体的浓度,发光实验时快速操作来解决“淬灭”的问题。

以上就是淬灭这篇文章的一些介绍,希望对大家有所帮助。

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